همسانه سازی و بیان ژن پراکسیداز در چند باکتری خاکزی

خاک از مواد آلی، معدنی، گازها، مایعات و میکروارگانیسم های بی شماری تشکیل شده است. باکتری ها از جمله فراوان ترین و کوچک ترین میکروارگانیسم ها هستند که بیشتر آن ها در 10سانتیمتری عمق خاک که غنی از مواد آلی است زندگی می کنند. پراکسیداز ها خانواده ی بزرگی از آنزیم ها هستند که نقش های فراوانی را در تمام موجودات از میکروارگانیسم ها گرفته تا انسان ها ایفا می کنند. هدف از اجرای این پژوهش بررسی و مطالعه سه نمونه خاک از سه منطقه متفاوت، شناسایی و توالی یابی باکتری های آن ها، همسانه سازی و توالی یابی ژن پراکسیداز و بررسی بیان آن طی تنش دو فلز سنگین است. بدین منظور ابتدا بررسی و آزمایش های فیزیکوشیمیایی روی سه نمونه خاک، هر کدام از سه منطقه ی دریاچه ی نمک، تالاب انزلی و دریاچه ی ارومیه انجام شد. جنس خاک دریاچه ی نمک (لومی-شور)، تالاب انزلی (لومی) و دریاچه ی ارومیه نیز (لومی-شور) تعیین شد. تعدادی باکتری خاکزی با فنوتیپ کلونی متفاوت از این خاک ها جداسازی و خالص سازی شد. با تکثیر و توالی یابی قطعه 16s rdna، جنس ،گونه و سویه چهار باکتری شناسایی شده تعیین شد. در نهایت باکتریachromobacter xylosoxidans سویه e.m1 با شماره دسترسیkp635392 از خاک تالاب انزلی، باکتری achromobacterxylosoxidans سویه e.m2 و باکتریachromobacter xylosoxidans سویه e.m3 به ترتیب با شماره دسترسی kp635393 و kp635394 از خاک دریاچه نمک قم وباکتریachromobacter xylosoxidans سویه e.m4 با شماره دسترسی kp635395از خاک دریاچه نمک ارومیه در پایگاه بانک ژن ncbi به ثبت رسید. یکسری آزمایش های بیوشیمیایی روی باکتری های شناسایی شده انجام شد. کمیت و کیفیت پروتئین کل نیز مورد بررسی قرار گرفت.آغازگرهای ژن پراکسیداز طراحی و پس از تکثیر و همسانه سازی ژن هدف در ناقل ptg 19-t و توالی یابی نوکلئوتیدی، ژن پراکسیداز با شماره دسترسی kp635396 در پایگاه بانک ncbi به ثبت رسید. اثرتنش دو فلز سنگین کبالت و کادمیوم در غلظت های (01/0، 05/0، 1/0) روی ژن پراکسیداز باکتری achromobacter xylosoxidans سویه e.m2 بررسی شد و در هردو تیمار غلظت 05/0 میلی مولار بیشترین شدت بیان را نشان داد.